客服热线：
手机版
二维码
激光扫描共聚焦成像的成败，70%取决于样品制备。以下六条注意事项可限度避免“图像模糊、信号淬灭、结构变形”三大常见问题。
厚度控制：无论是冰冻还是石蜡切片，厚度以5–15 µm为最佳；过厚会因激发光衰减造成深层信号缺失。
贴附与平整：使用多聚赖氨酸或Cell-Tak预处理玻片，防止扫描过程中样品漂移；载玻片厚度0.8–1.2 mm，盖玻片0.17 mm，确保光路校正。
固定通透：4%多聚甲醛室温固定15 min，0.1% Triton X-100通透5 min，既保留结构又允许抗体进入；过度固定会升高背景自发荧光。
荧光标记：选择无光谱交叉的探针组合，先低倍预扫确定最佳激光功率，再正式采集，避免多次照射导致荧光淬灭。
封片与保存：甘油-PBS（9:1）加2.5% DABCO防淬灭剂封片，4 °C避光保存；长期存放需用指甲油密封盖片四周以防蒸发。
活细胞成像：使用玻底共聚焦培养皿，保持37 °C、5% CO₂，减少开关激光次数并调低功率，降低光毒性。
遵循以上要点，即可获得高分辨率、低背景、三维可重构的优质共聚焦图像。
https://lifescience.evidentscientific.com.cn/zh/landing/objectives/research/confocal/
